Страница главного редактора
Клиническая трансплантология
В представленном наблюдении у пациента после выполненной трансплантации печени (ТП) в рамках Миланских критериев по поводу гепатоцеллюлярного рака (ГЦР) через 16 месяцев выявлено прогрессирование заболевания в трансплантате, левом легком и бронхопульмональных лимфоузлах. На фоне проведения комбинированного лечения в виде химиоэмболизации печеночной артерии (ХЭПА), системной таргетной терапии и стереотаксической лучевой терапии на метастатический узел левого легкого достигнута стабилизация заболевания по внепеченочным очагам. В сложившейся ситуации резекция трансплантата печени рассматривалась нами как единственная лечебная опция, дающая шанс на значимое продление жизни пациента. Однако обширная резекция правой доли печени представлялась небезопасной ввиду ряда лимитирующих факторов: пограничный объем функционального резерва остающейся части печени: Future Liver Remnant (FLR) – 599 см3 (32%); скорость элиминации индоциалина зеленого из плазмы – plasma disappearance rate (PDR) – 12,3%/мин; инвазия опухоли бассейна средней печеночной вены. В этом случае эмболизация правой ветви воротной вены (ПВВВ) могла способствовать викарной гипертрофии остающейся части печени, но срок ее ожидания обычно превышает три-четыре недели, и ПВВВ на тот момент уже была частично блокирована опухолью. Единственным вариантом хирургического вмешательства являлась, по нашему мнению, двухэтапная резекция печени по методике Associated Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy (ALPPS), несмотря на отсутствие литературных данных о выполнении подобных операций на трансплантате печени. На 5-е послеоперационные сутки от первого этапа была достигнута гипертрофия FLR – 799 см3, что позволило относительно безопасно провести второй этап вмешательства. Грамотная тактика в отношении медикаментозного обеспечения в условиях ОРИТ и проведения заместительной почечной терапии позволили справиться с сепсисом и острой почечной недостаточностью – превалирующими осложнениями в послеоперационном периоде.
Актуальность. Заболевания сердечно-сосудистой системы широко распространены у реципиентов солидных органов и связаны с ухудшением исходов трансплантации. Эластичность артериальной сосудистой стенки является важным прогностическим показателем и маркером риска развития сердечно-сосудистых заболеваний. Неинвазивное измерение показателя эластичности стенки общей сонной артерии может быть полезным при оценке сердечно-сосудистого риска у реципиентов солидных органов.
Цель: сравнительный анализ показателей эластичности стенки общей сонной артерии у реципиентов солидных органов и изучение их связи с факторами, потенциально обладающими отрицательным воздействием на риск развития нежелательных событий.
Материалы и методы. В исследование включено 154 пациента в возрасте от 10 до 75 лет, среди которых реципиенты сердца (n = 77), печени (n = 9) и почки (n = 35), а также 33 больных терминальной сердечной недостаточностью, включенных в лист ожидания трансплантации сердца. У всех участников выполняли ультразвуковое исследование сонных артерий и определение скорости пульсовой волны; рассчитывался показатель эластичности стенки общей сонной артерии (ОСА).
Результаты. Выявлена достоверная негативная корреляция показателя эластичности стенки общей сонной артерии с возрастом, индексом массы тела, уровнем систолического артериального давления, величиной показателя скорости клубочковой фильтрации почек, толщины комплекса «интима–медиа» общей сонной артерии и скоростью распространения пульсовой волны в аорте. У реципиентов сердца показатель эластичности стенки общей сонной артерии был достоверно ниже, чем у реципиентов печени и почки (р = 0,002) и негативно коррелировал с длительностью срока, прошедшего после трансплантации, что, вероятно, связано с денервацией сердечного трансплантата.
Заключение. Показатель эластичности стенки ОСА, определяемый при помощи неинвазивного ультразвукового исследования, отражает степень неблагоприятного воздействия патологических факторов на магистральные артерии у реципиентов солидных органов.
Цели: сосудистые осложнения после трансплантации печени могут представлять существенную угрозу жизни реципиента, так как при нарушении кровотока в трансплантате значительно увеличивается риск потери донорской печени. Диагностика и своевременное лечение сосудистых осложнений представляется актуальной проблемой трансплантологии. Целью этого исследования была оценка заболеваемости, лечения и исхода сосудистых осложнений пациентов после ортотопической трансплантации печени в центре хирургии и координации донорства Ростовской областной клинической больницы.
Материалы и методы. В период с июля 2015 года по апрель 2023 года было выполнено 100 ортотопических трансплантаций печени. Ретро спективно идентифицированы и проанализированы сосудистые осложнения у реципиентов.
Результаты. Общая частота возникновения сосудистых осложнений составила 24% (n = 24), из них: стеноз печеночной артерии – 5% (n = 5), внутрибрюшные кровотечения – 6% (n = 6), диссекции стенки ПА – 2% (n = 2), внутрипеченочные венозные тромбозы (синдром Бадда–Киари) – 2% (n = 2), тромбоз воротной вены 1% (n = 1), тромбоз нижней полой вены/илеофеморальный венозный тромбоз – 2% (n = 2), стеноз нижней полой вены – 1% (n = 1), стеноз печеночной вены – 1% (n = 1), повторный стеноз/тромбоз ПА – 2% (n = 2), тромбоз брыжеечных вен – 2% (n = 2).
Вывод. Большинство сосудистых осложнений после ортотопиче ской трансплантации печени возникают в раннем послеоперационном периоде и могут привести к высокому риску дисфункции трансплантата и смерти пациента. Раннее распознавание, диагностика и лечение осложнений после ортотопической трансплантации печени имеют решающее значение для успешного краткосрочного и долгосрочного функционирования трансплантата и выживаемости пациентов, даже у пациентов с бессимптомным течением осложнения. Варианты лечения обычно включают хирургическую реваскуляризацию, чрескожный тромболизис, чрескожную ангиопластику, ретрансплантацию или реже консервативный подход.
Цель: изучить динамику параметров системы гемостаза в раннем послеоперационном периоде и выделить сроки восстановления уровня про- и антикоагулянтов, синтезируемых печенью, у реципиентов доли печени от живого родственного донора.
Материалы и методы. Под наблюдением находились 31 реципиент и 31 родственный донор доли печени, получавшие лечение в ГУ «РСНПМЦХ им. ак. В. Вахидова» в период с августа 2022-го по август 2023 г. Проводилось определение параметров системы гемостаза у реципиентов с неосложненным течением послеоперационного периода.
Результаты. Выявлено, что компенсация в системе гемостаза происходит даже при низком уровне факторов коагуляции на 10-е сутки после трансплантации печени. У реципиентов снижение антикоагулянтов более выражено, нежели прокоагулянтов, а в целом система гемостаза находится в неустойчивом равновесии, которое под влиянием внешних и внутренних факторов легко может сместиться как в сторону гипер-, так и гипокоагуляционного состояния. Значимым влияющим фактором при этом является активность фибринолитической системы и уровень фибриногена. Постепенное восстановление концентрации фибриногена к концу первых суток после операции – это результат включения синтетической функции печени. После трансплантации печени имеются признаки активации эндотелия, но не его повреждения, которые регрессируют и нормализуются к 10-м суткам после операции. В то же время в исходном статусе у реципиентов имеется повышение как количества, так и активности фактора Виллебранда, что указывает на повреждение эндотелия и эндотелиальной дисфункции. Низкий уровень гомоцистеина у реципиентов, вероятно, является протективным фактором в отношении развития тромботических осложнений, а его динамика отражает постепенное восстановление функциональной активности печени, адаптации донорской печени к функционированию.
Заключение. Мониторинг системы гемостаза у реципиентов после трансплантации печени позволяет не только своевременно предотвратить тромбогеморрагические осложнения, но и судить о динамическом равновесии про- и антикоагулянтов, сроках восстановления активности основных факторов системы гемостаза и, согласно этому, варьировать режимы введения антикоагулянтов, антиагрегантов, ингибиторов фибринолиза, проводить заместительную терапию и реализовывать концепцию управления гемостазом.
Бронхиальные стенозы являются одной из основных причин тяжелого течения послеоперационного периода у реципиентов донорских легких. Одним из методов восстановления проходимости дыхательных путей является реканализация с использованием лазера. Данная методика востребована ввиду сочетания режущих и коагуляционных эффектов. В данной статье продемонстрирована возможность использования фиброволоконного тулиевого лазера при внутрипросветном использовании с целью реканализации бронхиальных стенозов у реципиентов легких.
Сосудистые осложнения после трансплантации печени являются редкими, однако представляют собой грозные состояния, которые могут потенциально привести к потере трансплантата и гибели реципиента. В данной работе проанализирован международный опыт своевременной диагностики разнообразных сосудистых осложнений, которые могут развиться у реципиентов после проведенной трансплантации печени, а также оптимальные сроки и методы лечения данных осложнений.
Актуальность. Возможность индукции иммунологической толерантности у реципиентов аллогенного органного трансплантата является научной задачей трансплантологического сообщества, поскольку это обеспечит вероятность полного приживления чужеродного органа. Однако в настоящее время такая задача остается трудновыполнимой.
Цель: продемонстрировать длительное функционирование трансплантата почки без признаков острого отторжения и иммуносупрессивной терапии у пациентки, которой по поводу посттрансплантационного лимфопролиферативного заболевания была выполнена аллогенная трансплантация аллогенных стволовых гемопоэтических клеток (ТГСК) от гаплоидентичного донора.
Методы и материалы. Оценку функции трансплантата реципиента проводили с использованием клинико-лабораторных, инструментальных и патоморфологических методов исследования.
Результаты. У реципиента почки на фоне отсутствия иммуносупрессивной терапии сроком более четырех лет отмечено сохранение стабильной удовлетворительной функции почечного трансплантата.
Заключение. Описанный клинический случай свидетельствует о развитии иммунологической толерантности к трансплантату почки у реципиента аллогенных стволовых гемопоэтических клеток (ГСК).
Введение. Атипичный гемолитико-уремический синдром (аГУС) – орфанное системное заболевание, которое воспроизводится в виде стихийной активации альтернативного пути системы комплемента и выражается в виде системной тромботической микроангиопатии (ТМА). Классическую триаду симптомов аГУС составляют гемолитическая анемия, тромбоцитопения и острое повреждение почек (ОПП). На данный момент диагноз аГУС относится к числу диагнозов исключений и не имеет патогномоничных признаков. Он устанавливается на основе клинической картины заболевания после исключения других форм ТМА, как первичных, так и вторичных.
Цель: повысить информированность врачей об орфанном заболевании, о методах диагностики и лечения аГУС на клиническом примере.
Заключение. Крайне важна как можно более ранняя идентификация диагноза аГУС, так как своевременно начатая таргетная терапия позволяет значительно улучшить или полностью восстановить функцию пораженного органа.
Актуальность. Злокачественные новообразования (ЗНО) являются одной из главных причин неблагоприятных исходов у реципиентов солидных органов в отдаленные сроки после трансплантации. Локализация ЗНО в трансплантированном органе может стать причиной утраты его функции. Среди причин поздней потери трансплантата почки злокачественные новообразования занимают одну из лидирующих позиций, после хронической дисфункции трансплантата и инфекций. Заболеваемость различными типами злокачественных новообразований различается в зависимости от трансплантированного органа. Знание этиологии, патогенеза, особенностей диагностики и лечения злокачественных новообразований у реципиентов трансплантатов солидных органов – значимая часть скрининга на любой стадии посттрансплантационного периода. Несвоевременная диагностика злокачественных новообразований пересаженной почки в условиях разобщения этапности лечения и наблюдения не только приводит к утрате трансплантата, но и ставит под угрозу жизнь реципиентов.
Описание клинического случая. Пациентка 29 лет. В анамнезе: IgA-нефропатия с исходом в нефросклероз. Заместительная почечная терапия (ЗПТ) программным гемодиализом с марта 2019 г. Трансплантация почки от посмертного донора на правые наружные подвздошные сосуды от 13.03.2019 г. Функция трансплантата немедленная. В октябре 2020 г. впервые выявлено новообразование трансплантированной почки. В ноябре 2021 г. экстренно выполнена нефрэктомия трансплантата по жизненным показаниям. Проводилась антибактериальная, противогрибковая терапия. Получены результаты морфологического исследования удаленного почечного трансплантата с иммуногистохимией (ИГХ). Структура и фенотип опухоли соответствуют миелоидной саркоме. Трепанобиопсия: нормоклеточный костный мозг.
Заключение. У пациентки 29 лет была диагностирована миелоидная саркома трансплантата почки с развитием паранеопластического синдрома, явлений полиорганной недостаточности. В настоящее время пациентка получает ЗПТ программным гемодиализом в плановом порядке. Пациенты с трансплантированными органами нуждаются в курации с привлечением мультидисциплинарной команды профильных и узкоспециализированных специалистов с учетом коморбидного статуса и особенностей течения основного заболевания.
Трансплантация сердца и вспомогательное кровообращение
Цель исследования: оценить результаты трансплантаций сердца, выполненных в ГБУ РО «Ростовская областная клиническая больница» за пять лет.
Материалы и методы. В период с 2017-го по 2022 год в нашей клинике было выполнено 29 ортотопических трансплантаций сердца (ТС). Причиной сердечной недостаточности в 21 случае (72,4%) являлся постинфарктный кардиосклероз, в 8 случаях (27,6%) – дилатационная кардиомиопатия. Реципиентами были 27 (93,1%) мужчин и 2 (6,9%) женщины. Средний возраст составил 53,14 ± 8,7 года (от 34 до 67 лет). Всем пациентам проводилась четырехкомпонентная иммуносупрессивная терапия, включающая в себя индукцию моноклональными антителами, а после ТС использовались ингибитор кальциневрина, микофеноловая кислота и кортикостероид.
Результаты. Госпитальная летальность составила 10,34% (n = 3). Причинами летальных исходов в этот период стали полиорганная недостаточность и инфекционно-септические осложнения. После выписки за 5 лет умерло 4 (13,8%) реципиента. Причинами смерти в отдаленном периоде стали реакция отторжения с развитием дисфункции трансплантата – у 3 (75%) реципиентов, инфекционно-септические осложнения – у 1 (25%) реципиента. Анализ выживаемости проводился по методу Kaplan–Meier. Годовая выживаемость составила 80,9%. Трехлетняя выживаемость соответствует пятилетней и составила 70,56%. 5-летняя выживаемость пациентов, переживших первый год после ТС, составила 86,1%. Максимальный срок наблюдения – 64 месяца.
Заключение. Трансплантация сердца является наиболее эффективным методом лечения больных с терминальной сердечной недостаточностью. Пятилетний опыт ТС в нашем центре показал уровень выживаемости, сопоставимый с данными международного общества ISHLT.
Цель: представить клиническое наблюдение ребенка 11 лет, перенесшего повторную трансплантацию сердца в ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России.
Материалы и методы. Описан случай успешной ретрансплантации сердца у ребенка 11 лет с васкулопатией сердечного аллотрансплантата.
Результаты. Течение послеоперационного периода у пациента после ретрансплантации сердца не имело существенных различий с послеоперационным периодом первичных реципиентов сердца. Сложность интраоперационного этапа определялась выраженным спаечным процессом. В рамках предоперационной подготовки пациенту была выполнена КТ грудной клетки, что, по нашему опыту, позволяет оценить синтопию сердца и в свою очередь является важным подготовительным этапом при планировании повторных вмешательств.
Заключение. Наш первый опыт ретрансплантата сердца у пациентов детской возрастной группы говорит о том что повторная трансплантация сердца подходит как наиболее оптимальный метод лечения у пациентов с васкулопатией сердечного аллотрансплантата и требует более тщательной предопе рационной подготовки.
.
Регенеративная медицина и клеточные технологии
Цель работы: исследование биологических свойств макропористого криоструктурата из концентрированного коллагенсодержащего раствора в качестве перспективной матрицы для формирования клеточно- и тканеинженерных конструкций.
Материалы и методы. Макропористый губчатый носитель получали методом криоструктурирования коллагенсодержащего экстракта, приготовленного путем уксуснокислого гидролиза соединительной ткани цыплят (АО «БИОМИР сервис», РФ). Для придания водонерастворимости криоструктурату использовали N-(3-диметиламинопропил)-N’-этилкарбодиимид (Sigma-Aldrich, США). Исследование микроморфологии поверхности губки проводили с использованием сканирующей электронной микроскопии. Цитотоксичность носителя оценивали по реакции клеточной культуры фибробластов мыши NIH 3T3 с использованием автоматического микроскопа IncuCyte ZOOM (EssenBioscience, США). Биосовместимость макропористого носителя изучали на культурах мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека (МСК ЖТч), линейных клетках гепатоцеллюлярной карциномы человека HepG2 и линейных клетках эндотелия пупочной вены человека EA.hy926. Определяли метаболическую активность клеток с использованием реагентов PrestoBlue™ (Invitrogen™, США). Развитие клеточной популяции при долговременном культивировании клеточно-инженерной конструкции (КИК) оценивали с помощью прижизненной флуоресцентной микроскопии по всей поверхности образца с использованием инвертированного микроскопа Leica Dmi8 с програмным обеспечением Leica Thunder (Leica Microsystems, ФРГ).
Результаты. Оптическая микроскопия и сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) показали наличие в полученном биополимерном материале пор разного размера: крупных, диаметром 237 ± 32 мкм, средних – 169 ± 23 мкм и малых – 70 ± 20 мкм; преимущественно наблюдали поры крупных и средних размеров. Исследуемые носители не проявляли цитотоксичности. Наблюдали адгезию и пролиферацию клеток на поверхности материала и их проникновение в подлежащие слои при долговременном культивировании. Наибольшая метаболическая активность клеток наблюдалась для МСК ЖТч на 14-е сутки, что соответствует нормальной динамике развития популяции клеток данного типа. В модели КИК печени была показана функциональная активность клеток HepG2 – продуцирование альбумина и мочевины.
Заключение. Хорошая адгезия и активная пролиферация, показанная для трех типов клеток, свидетельствует о биосовместимости полученного биополимерного носителя, а распространение клеток во внутренний объем губки и ее активное заселение при долговременном культивировании указывает на целесообразность использования данного материала для создания клеточно- и тканеинженерных конструкций.
Цель: изучить влияние кондиционированной среды от мезенхимальных стромальных клеток (МСК) из различных источников на пролиферацию хондроцитов человека.
Материалы и методы. Для подтверждения функциональной активности хондроциты культивировали в составе клеточно-инженерной конструкции (КИК) хряща, включающей 5 × 105 клеток и 5 мг тканеспецифического матрикса из децеллюляризованного хряща. Кондиционированную среду получали после культивирования МСК жировой ткани человека (ЖТч), пульпы молочного зуба и Вартонова студня пуповины в полной ростовой среде (ПРС). Для оценки влияния секретома МСК на пролиферацию хондроцитов кондиционированную среду, разбавленную в соотношении 1 : 1 с ПРС, вносили в лунки с хондроцитами. Влияние МСК на пролиферацию хондроцитов человека изучали при непрямом сокультивировании клеток в ПРС с использованием вставок Transwell. На дно нижней камеры наносили 5 × 104 МСК, в верхнюю камеру помещали 5 × 104 хондроцитов человека и 5 мг матрикса. Пролиферацию хондроцитов оценивали на 7-е и 14-е сутки путем количественного определения ДНК. В качестве маркера секреторной активности МСК в кондиционированной среде определяли содержание интерлейкина-6. Морфологию образцов исследовали с использованием гистологических методов окрашивания.
Результаты. Способность хондроцитов вырабатывать характерный для хряща внеклеточный матрикс была подтверждена при формировании КИК хряща с тканеспецифическим матриксом в хондрогенной дифференцировочной среде. При сравнении влияния кондиционированной среды от МСК из различных источников на рост хондроцитов человека in vitro наблюдалось повышение пролиферации во всех образцах в сравнении с контролем. Непрямое сокультивирование МСК с хондроцитами в составе КИК показало повышение количества ДНК во все образцах к 14-м суткам, при этом количество ДНК в образце с кондиционированной средой от МСК ЖТч значимо превышало контроль.
Заключение. Проведенные исследования по изучению влияния кондиционированной среды от МСК на пролиферацию хондроцитов в 2D-культуре указывают на возможный регенераторный потенциал МСК по восстановлению хрящевой ткани. В рамках данной работы мы не выявили достоверных различий в действии секретома МСК из различных источников на пролиферацию хондроцитов, однако в дальнейшем целесообразно проведение дополнительных исследований in vivo.
Трансплантомика
Разработка методов малоинвазивной диагностики осложнений у реципиентов на основе анализа уровней молекулярных и генетических биомаркеров – актуальная задача современной трансплантологии. К числу потенциальных индикаторов осложнений относится трансформирующий фактор роста бета-1 (TGF-β1), оказывающий множественные эффекты в организме.
Цель: оценка диагностической значимости TGF-β1, определяемого в сыворотке крови реципиентов, при дисфункции трансплантированной почки.
Материалы и методы. В исследование включены 129 реципиентов почки в возрасте от 17 до 68 лет и 35 здоровых лиц. Концентрацию TGF-β1 в сыворотке крови реципиентов определяли иммуноферментным методом.
Результаты. В число реципиентов почки вошли 95 пациентов с лабораторными и клиническими признаками дисфункции трансплантата, которым была выполнена биопсия трансплантированной почки с последующим морфологическим исследованием, и 34 реципиента с нормальной функцией. Уровень TGF-β1 у реципиентов почки был достоверно выше, чем у здоровых лиц (p = 0,00001), не коррелировал с большинством параметров анализа крови, со скоростью клубочковой фильтрации (СКФ). У реципиентов почки с дисфункцией трансплантата уровень TGF-β1 значимо выше, чем у остальных реципиентов (р = 0,018). У реципиентов с дисфункцией трансплантата по результатам морфологического исследования выявлены: острый канальцевый некроз (ОКН, n = 11), острое клеточное отторжение (ACR, n = 26), острое гуморальное отторжение (AMR, n = 35), не связанный с иммунным ответом нефросклероз с признаками нефротоксичности ингибиторов кальциневрина (СNI-нефротоксичность, n = 13), возвратный гломерулонефрит (хроническое отторжение трансплантата, n = 10). У реципиентов с повреждениями трансплантата иммунного характера (ACR, AMR и хроническое отторжение) концентрация TGF-β1 в сыворотке крови выше, чем у реципиентов с дисфункцией от иных причин, р < 0,0001. У реципиентов почки с концентрацией TGF-β1 в сыворотке крови, превышающим пороговое значение 94,3 нг/мл, риск выявления дисфункции трансплантата, вызванной иммунными механизмами, выше, чем у остальных реципиентов почки (RR = 2,2 ± 0,22 [95% ДИ 1,46–3,46]), при чувствительности теста 77,5% и специфичности 60,3%.
Заключение. Рассчитанный пороговый уровень TGF-β1 в сыворотке крови реципиентов почки может рассматриваться в качестве вспомогательного индикатора дисфункции трансплантата, обусловленной острым или хроническим отторжением.
Заместительная почечная терапия
Пациенты с хронической болезнью почек подвержены развитию острого панкреатита. Представляем редкое клиническое наблюдение острого панкреатита с формированием панкреонекроза у пациентки на перитонеальном диализе (ПД), дебютировавшее диализным перитонитом. При госпитализации диагностические критерии острого панкреатита отсутствовали, лечение диализного перитонита было без эффекта. При повторном ультразвуковом исследовании выявлены признаки диффузных изменений поджелудочной железы и многокамерного образования малого таза. Рефрактерное течение перитонита, неадекватная ультрафильтрация, неясный характер образования в малом тазу явились основанием для диагностической лапароскопии и удаления перитонеального катетера. При ревизии брюшной полости обнаружены пятна стеаринового некроза по всей поверхности брюшины и большого сальника, в малом тазу имеются спайки между маткой и участком прямой кишки. Развитие панкреонекроза подтверждено компьютерной томографией органов брюшной полости. Лечение острого панкреатита было без эффекта, развился инфаркт миокарда 2-го типа, при нарастающих явлениях полиорганной недостаточности наступил летальный исход. Обсуждаются возможные причины развития деструктивного панкреатита и особенности его течения у ПД-пациентки. Необходима настороженность в отношении данного заболевания при возникновении диализного перитонита.
Донорство органов
Цель: провести сравнительное исследование эффективности 6-часовой нормотермической аутоперфузии сердечного трансплантата ex vivo и фармакохолодовой консервации раствором Bretschneider (Custodiol®, Германия).
Материалы и методы. В качестве модели для проведения серии острых экспериментов были использованы свиньи породы ландрас весом 50 ± 5 кг в возрасте 4–5 месяцев (n = 10). В экспериментальной группе (n = 5) кондиционирование сердечно-легочного комплекса проводили методом аутоперфузии в течение 6 часов. В контрольной группе восстановление насосной функции сердца выполняли после 6-часовой фармакохолодовой консервации раствором Bretschneider. Оценку эффективности консервации трансплантата проводили путем измерения параметров гемодинамики, сократительной функции миокарда, потребления миокардом кислорода.
Результаты. После реперфузии и повторной изоляции работающего сердечно-легочного комплекса сердечный выброс составил 0,63 [0,37; 0,8] л/мин и 0,37 [0,23; 0,37] л/мин в экспериментальной и контрольной группах соответственно (р < 0,05). Показатели – глобальная ударная работа левого желудочка и рекрутируемая преднагрузкой ударная работа сердца – были значительно выше в экспериментальной группе (р < 0,05).
Заключение. В ходе проведенного исследования было показано значительное преимущество нормотермической аутоперфузии в сохранении морфофункционального статуса донорского сердца по сравнению со статической фармакохолодовой консервацией раствором Bretschneider в течение 6 часов.
Цель: в эксперименте in vitro изучить выживаемость и сохранность пролиферативной активности лимбальных стволовых клеток (ЛСК) в фрагментах ткани лимба, выкроенных фемтосекундным лазером (ФСЛ).
Материалы и методы. Из донорских кадаверных глаз (n = 8) в верхней и нижней частях лимба, содержащих наибольшее количество лимбальных стволовых клеток, фемтосекундным лазером модели Z8 (Ziemer, Швейцария) формировали лимбальные фрагменты, которые фрагментировали на 4 мини-трансплантата с применением разных уровней энергии (100, 110, 120%). Контролем служили мини-трансплантаты из симметричных участков кадаверных глаз, которые выделяли мануально при помощи микрохирургического лезвия. Культивирование мини-трансплантатов проводили на протяжении двух недель в культуральных средах, предназначенных для лимбальных эпителиальных стволовых клеток (ЛЭСК) (Epilife (0,06 мМ Ca++) и для мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (ММСК) (DMEM/F12) с добавлением специфических факторов роста с целью избирательного стимулирования ЛЭСК или ММСК соответственно. Фенотип полученных культивированных клеток в группах «лазер» и «нож» определяли методом проточной цитофлуориметрии с использованием набора маркеров к мембранным белкам ЛЭСК и ММСК: CD166, CD105, CD90, CD29, CD34. Способность культивированных клеток к адгезии и пролиферации в группах «лазер» и «нож» определяли путем посева третьего пассажа полученных культур на Боуменову мембрану бесклеточных роговиц.
Результаты. Первичную культуру клеток получили из мини-трансплантатов всех доноров в обеих группах. Морфология клеток соответствовала фенотипу эпителиальных клеток роговицы (паттерн по типу «булыжной мостовой»). При культивировании в среде EpiLife (0,06 мМ Ca++) определили наличие пролиферации ЛСК из 38,6% мини-трансплантатов, в среде DMEM/F12 (1 : 1) – из 31,8%. Через две недели выход клеток из мини-трансплантатов в группах «лазер» и «нож» составил 77,2 и 63,6% соответственно. Рост клеток к концу второй недели культивирования мини-трансплантатов, полученных ФСЛ на энергиях 120, 110 и 100%, составил соответственно 87,5; 71,4 и 71,4%. Было установлено, что полученные культуры клеток в группах «лазер» и «нож» и подгруппах «120%», «110%» и «100%» фенотипически не отличались. Анализ методом цитофлуориметрии показал, что культуры клеток в группах имели смешанный паттерн экспрессии маркеров как ЛЭСК (CD29+), так и ММСК (CD90+, CD105+). Посев третьего пассажа культуры клеток в исследуемых группах во всех случаях продемонстрировал адгезию и формирование на Боуменовой мембране модельных роговиц монослоя клеток.
Заключение. Применение ФСЛ для выкраивания лимбальных трансплантатов представляется нам эффективным и безопасным по сравнению с традиционной механической (ножевой) методикой. Культуры клеток, полученные из мини-трансплантатов, выкроенных ФСЛ, были способны к росту и миграции на протяжении как минимум 21 суток.
В статье проводится оценка изменений в освещении проблемы донорства в России. Обозначаются границы ведения диалога о посмертном донорстве с учетом действующей в России модели донорства. Дается определение понятию социального капитала, социологии донорства и их значения для развития посмертного донорства. Предлагаются шаги по продвижению концепции посмертного донорства в нашей стране.