Preview

Вестник трансплантологии и искусственных органов

Расширенный поиск

Особенности технологии децеллюляризации фрагментов печени человека как тканеспецифического мелкодисперсного матрикса для клеточно-инженерной конструкции печени

https://doi.org/10.15825/1995-1191-2017-4-70-77

Полный текст:

Аннотация

К одной из актуальных задач при создании биоинженерной печени как альтернативы трансплантации донорской печени при лечении терминальных стадий печеночной недостаточности относится поиск матрикса, способного временно выполнять функции внеклеточного матрикса (ВКМ) печени и обеспечивать необходимые условия для поддержания жизнеспособности и функциональной эффективности клеток. Основным недостатком матриксов из резорбируемых биополимерных материалов является отсутствие тканеспецифичности и невозможность воспроизведения уникальной структуры ВКМ печени. Цель настоящей работы состояла в разработке технологии получения децеллюляризированных фрагментов печени с сохранением структурных свойств ее ВКМ.

Материалы и методы. Децеллюляризацию механически измельченных фрагментов печени человека проводили в трех сменах буферного раствора (рН = 7,4), содержащего 0,1% додецилсульфата натрия и повышающуюся концентрацию Тритона Х100 (1, 2 и 3% соответственно). Исследовали влияние длительности, условий отмывки (статика, динамика, ротационная система, магнитная мешалка) и способов измельчения печени на сохранность структуры ВКМ печени и полноту удаления клеточных элементов и детрита. Срезы децеллюляризованных образцов фрагментов печени окрашивали гематоксилином и эозином, а также методом Массона для выявления соединительно-тканных элементов.

Результаты и обсуждение. Методами гистологического анализа показано, что оптимальным является режим отмывки фрагментов печени в течение 3 суток при комнатной температуре в статике, сопровождающийся перемешиванием на магнитной мешалке 2–3 раза в сутки в течение 1 ч. Более длительное время или большая кратность режима перемешивания сопровождается увеличением риска нарушения структуры печеночной ткани. Предложен алгоритм предварительного исследования донорской печени человека с целью оптимизации процесса получения децеллюляризированных фрагментов печени.

Выводы. Предложен алгоритм оценки пригодности донорской печени человека для децеллюляризации и найдены оптимальные условия получения децеллюляризированных фрагментов печени с сохранением структуры ВКМ печени и полным удалением клеточных элементов и детрита.

Об авторах

Е. А. Немец
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России.
Россия
Москва.


Л. А. Кирсанова
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России.
Россия
Москва.


Ю. Б. Басок
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России.
Россия
Москва.


М. Ю. Шагидулин
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России; ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский университет).
Россия
Москва.


Е. А. Волкова
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России.
Россия
Москва.


С. Т. Метельский
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России.
Россия
Москва.


В. И. Севастьянов
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр трансплантологии и искусственных органов имени академика В.И. Шумакова» Минздрава России.
Россия
Москва.


Список литературы

1. Sevastianov VI. Technologies of tissue engineering and regenerative medicine. Russian J. of Transplantology and Artifi cial Organs. 2014; 16 (3): 93–108.

2. Shagidulin M, Onishchenko N, Krasheninnikov M et al. Treatment of chronic liver failure by transplantation of liver cells and bone marrow stem cells: 1 year experience // Proceeding of the European Society for Surgical Research, ESSR 2012, 47th Annual Congress (6–9 June 2012, Lille, France). 2012: 77–81.

3. Morris AH, Stamer DK, Kyriakides TR. The host response to naturally-derived extracellular matrix biomaterials. Semin. Immunol. 2017; pii: S1044-5323(16)30110-5.

4. Sabetkish S, Kajbafzadeh AM, Sabetkish N, Khorramirouz R, Akbarzadeh A, Seyedian SL et al. Whole-organ tissue engineering: decellularization and recellularization of three-dimensional matrix liver scaffolds. J. Biomed. Mater. Res. A. 2015; 103 (4): 1498–1508.

5. Nari GA, Cid M, Comín R, Reyna L, Juri G, Taborda R, Salvatierra NA. Preparation of a three-dimensional extracellular matrix by decellularization of rabbit livers. Rev. Esp. Enferm. Dig. 2013; 105 (3): 138–143.

6. Bühler NE, Schulze-Osthoff K, Königsrainer A, Schenk M. Controlled processing of a full-sized porcine liver to a decellularized matrix in 24 h. J. Biosci Bioeng. 2015; 119 (5): 609–613.

7. Zheng X, Xiang J, Wu W, Liu X, Liu W, Lü Y. Preparation of a decellularized scaffold derived from human liver tissue. Nan. Fang. Yi Ke Da Xue Xue Bao. 2015; 35 (7): 1028–1033.


Для цитирования:


Немец Е.А., Кирсанова Л.А., Басок Ю.Б., Шагидулин М.Ю., Волкова Е.А., Метельский С.Т., Севастьянов В.И. Особенности технологии децеллюляризации фрагментов печени человека как тканеспецифического мелкодисперсного матрикса для клеточно-инженерной конструкции печени. Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2017;19(4):70-77. https://doi.org/10.15825/1995-1191-2017-4-70-77

For citation:


Nemets E.A., Kirsanova L.A., Basok J.B., Schagidulin M.J., Volkova E.A., Metelsky S.T., Sevastianov V.I. Technology features of decellularization of human liver fragments as tissue-specific fine-grained matrix for cell-engineering liver construction. Russian Journal of Transplantology and Artificial Organs. 2017;19(4):70-77. (In Russ.) https://doi.org/10.15825/1995-1191-2017-4-70-77

Просмотров: 178


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1995-1191 (Print)
ISSN 2412-6160 (Online)