vtioВестник трансплантологии и искусственных органовRussian Journal of Transplantology and Artificial Organs1995-1191Academician V.I.Shumakov National Medical Research Center of Transplantology and Artificial Organs", Ministry of Health of the Russian Federation10.15825/1995-1191-2021-3-101-114vtio-1334Research ArticleРЕГЕНЕРАТИВНАЯ МЕДИЦИНА И КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИREGENERATIVE MEDICINE AND CELL TECHNOLOGIESФормирование монослоя эндотелиальных клеток на поверхности сосудистого протеза малого диаметра в условиях потокаEndothelial cell monolayer formation on a small-diameter vascular graft surface under pulsatile flow conditionsХановаМ. Ю.KhanovaM. Yu.

Ханова Марьям Юрисовна, младший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий

650002, Кемерово, Сосновый бульвар, 6

SPINв e-library: 5923-0432

Mariam Yu. Khanova

6, Sosnovy bulvar, Kemerovo, 650002

khanovam@gmail.comВеликановаЕ. А.VelikanovaE. A.

Великанова Елена Анатольевна, научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины.

Кемерово

1038-3804

Kemerovo

velikanova_ea@mail.ruМатвееваВ. Г.MatveevaV. G.

Матвеева Вера Геннадьевна,  старший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины

Кемерово

9914-3705

Kemerovo

matveeva_vg@mail.ruКривкинаЕ. О.KrivkinaE. O.

Кривкина Евгения Олеговна, младший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела

Кемерово

4560-0906

Kemerovo

leonora92@mail.ruГлушковаТ. В.GlushkovaT. V.

Глушкова Татьяна Владимировна, старший научный сотрудник лаборатории новых биоматериалов отдела экспериментальной медицины

Кемерово

3151-6002

Kemerovo

bio.tvg@mail.ruСевостьяноваВ. В.SevostianovaV. V.

Севостьянова Виктория Владимировна, научный сотрудник лаборатории клеточных технологий отдела экспериментальной медицины

Кемерово

6536-6068

Kemerovo

sevostv@gmail.comКутихинА. Г.KutikhinA. G.

Кутихин Антон Геннадьевич, заведующий лабораторией фундаментальных аспектов атеросклероза отдела экспериментальной медицины

Кемерово

Kemerovo

antonkutikhin@gmail.comАнтоноваЛ. В.AntonovaL. V.

Антонова Лариса Валерьевна, заведующая лабораторией клеточных технологий отдела экспериментальной медицины

Кемерово

8634-3286

Kemerovo

antonova.la@mail.ruФГБНУ «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний»РоссияResearch Institute for Complex Issues of Cardiovascular DiseasesRussian Federation202117092021233101114Copyright © Ханова М.Ю., Великанова Е.А., Матвеева В.Г., Кривкина Е.О., Глушкова Т.В., Севостьянова В.В., Кутихин А.Г., Антонова Л.В., 20212021Ханова М.Ю., Великанова Е.А., Матвеева В.Г., Кривкина Е.О., Глушкова Т.В., Севостьянова В.В., Кутихин А.Г., Антонова Л.В.Khanova M.Y., Velikanova E.A., Matveeva V.G., Krivkina E.O., Glushkova T.V., Sevostianova V.V., Kutikhin A.G., Antonova L.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://journal.transpl.ru/vtio/article/view/1334Цель

Цель: создать клеточнозаселенный сосудистый протез малого диаметра с использованием аутологичных эндотелиальных клеток и белков внеклеточного матрикса и оценить эффективность формирования эндотелиального монослоя при прекондиционировании напряжением сдвига в сосудистом протезе малого диаметра.

Материалы и методы

Материалы и методы. Методом электроспиннинга из смеси полигидроксибутирата/валерата (PHBV) и поликапролактона (PCL) изготовлены PHBV/PCL-трубчатые каркасы протезов сосудов и модифицированы фибрином. Для заселения в протезы из крови пациентов с ишемической болезнью сердца выделили культуру эндотелиальных клеток. Фенотипирование культуры колониеформирующих эндотелиальных клеток (КФЭК) проводили методом проточной цитометрии и иммунофлуоресцентной микроскопии, также исследовали пролиферативную и ангиогенную активность клеток. Клеточнозаселенные сосудистые каркасы культивировали в установке пульсирующего потока с итоговым напряжением сдвига 2,85 дин/см2. Влияние пульсирующего потока на формирование монослоя оценивали методами иммунофлуоресцентной, сканирующей электронной, атомной силовой микроскопии, полнотранскриптомным секвенированием.

Результаты

Результаты. Под влиянием пульсирующего потока эндотелиальные клетки, заселенные в трубчатый каркас, продемонстрировали увеличение уровня экспрессии белков эндотелиального профиля, фокальной адгезии и цитоскелета. Выявлены преимущества культивирования клеточнозаселенных сосудистых протезов в условиях пульсирующего потока с напряжением сдвига 2,85 дин/см2 в сравнении со статическими условиями, что отразилось на формировании устойчивой адгезии эндотелиальных клеток, а также цитоскелетных перестройках. Полнотранскриптомное секвенирование показало, что напряжение сдвига индуцировало повышение уровня экспрессии дифференциально экспрессируемых генов, кодирующих белки, обеспечивающие развитие сосудов, целостность эндотелия, эндотелиальный метаболизм. Разработан протокол изготовления персонифицированного клеточнозаселенного биодеградируемого сосудистого протеза малого диаметра в условиях пульсирующего потока.

Заключение

Заключение. Использование аутологичных фибрина и культуры КФЭК и прекондиционирование напряжением сдвига позволяют получить персонифицированный клеточнозаселенный сосудистый протез малого диаметра с непрерывным функциональным эндотелиальным монослоем, адаптированным к потоку.

Objective

Objective: to create a cell-populated small-diameter vascular graft (SDVG) using autologous endothelial cells and extracellular matrix proteins, and to evaluate the efficiency of endothelial cell monolayer formation during shear stress preconditioning in a SDVG.

Materials and methods

Materials and methods. PHBV/PCL tubular scaffolds of vascular grafts were made by electrospinning from a mixture of polyhydroxybutyrate-valerate (PHBV) copolymer and polycaprolactone (PCL) and modified with fibrin. To populate the graft, an endothelial cell culture was isolated from the blood of patients with coronary heart disease. Phenotyping of endothelial colony-forming cell (ECFC) culture was performed by flow cytometry and immunofluorescence microscopy. Cell proliferative and angiogenic activity were also studied. Cell-populated vascular scaffolds were cultured in a pulsatile flow setup with a final shear stress of 2.85 dyne/cm2. The effect of pulsatile flow on monolayer formation was assessed by immunofluorescence, scanning electron microscopy, atomic force microscopy, and whole-transcriptome RNA sequencing.

Results

Results. Under the influence of pulsatile flow, endothelial cells that were seeded into the tubular scaffold showed an increase in the expression level of endothelial profile proteins, focal adhesion and cytoskeleton. In contrast to endothelial cell culture on a vascular graft surface under static conditions, when cultured under pulsatile flow with 2.85 dyne/ cm2 shear stress, endothelial lining cells have an increased ability to adhere and are oriented along the pulsatile flow path. Whole-transcriptome RNA sequencing showed that induced shear stress increased expression levels of differentially expressed genes encoding proteins that ensure vascular development, endothelial integrity, and endothelial metabolism. A protocol for fabrication of a personalized cell-populated biodegradable SDVG under pulsatile flow conditions was developed.

Conclusion

Conclusion. The use of autologous fibrin and ECFC culture, as well as shear stress preconditioning, allow to obtain a personalized cell-populated SDVG with continuous functional endothelial monolayer adapted to the flow.

тканевая инженерияаутологичные эндотелиальные клеткипульсирующий потокперсонифицированный сосудистый протезtissue engineeringautologous endothelial cellspulsatile flowpersonalized vascular graftReferencesSong HG, Rumma RT, Ozaki CK, Edelman ER, Chen CS. Vascular Tissue Engineering: Progress, Challenges, and Clinical Promise. Cell Stem Cell. 2018; 22 (3): 340–354. doi: 10.1016/j.stem.2018.02.009.Song HG, Rumma RT, Ozaki CK, Edelman ER, Chen CS. Vascular Tissue Engineering: Progress, Challenges, and Clinical Promise. Cell Stem Cell. 2018; 22 (3): 340–354. doi: 10.1016/j.stem.2018.02.009.Mallis P, Kostakis A, Stavropoulos-Giokas C, Michalopoulos E. Future Perspectives in Small-Diameter Vascular Graft Engineering. Bioengineering. 2020; 7 (4): 160. doi: 10.3390/bioengineering7040160.Mallis P, Kostakis A, Stavropoulos-Giokas C, Michalopoulos E. Future Perspectives in Small-Diameter Vascular Graft Engineering. Bioengineering. 2020; 7 (4): 160. doi: 10.3390/bioengineering7040160.Ardila DC, Liou JJ, Maestas D, Slepian MJ, Badowski M, Wagner WR et al. Surface Modification of Electrospun Scaffolds for Endothelialization of Tissue-Engineered Vascular Grafts Using Human Cord Blood-Derived Endothelial Cells. J Clin Med. 2019; 8 (2): 185. doi: 10.3390/jcm8020185.Ardila DC, Liou JJ, Maestas D, Slepian MJ, Badowski M, Wagner WR et al. Surface Modification of Electrospun Scaffolds for Endothelialization of Tissue-Engineered Vascular Grafts Using Human Cord Blood-Derived Endothelial Cells. J Clin Med. 2019; 8 (2): 185. doi: 10.3390/jcm8020185.Braghirolli DI, Helfer VE, Chagastelles PC, Dalberto TP, Gamba D, Pranke P. Electrospun scaffolds functionalized with heparin and vascular endothelial growth factor inctease the proliferation of endothelial progenitor cells. Biomed Mater. 2017; 12 (2): 025003. doi: 10.1088/1748-605X/aa5bbc.Braghirolli DI, Helfer VE, Chagastelles PC, Dalberto TP, Gamba D, Pranke P. Electrospun scaffolds functionalized with heparin and vascular endothelial growth factor inctease the proliferation of endothelial progenitor cells. Biomed Mater. 2017; 12 (2): 025003. doi: 10.1088/1748-605X/aa5bbc.Антонова ЛВ, Севостьянова ВВ, Кутихин АГ, Великанова ЕА, Матвеева ВГ, Глушкова ТВ и др. Влияние способа модифицирования трубчатого полимерного матрикса биомолекулами bFGF, SDF-1α и VEGF на процессы формирования in vivo тканеинженерного кровеносного сосуда малого диаметра. Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2018; 20 (1): 96–109. doi: 10.15825/1995-1191-2018-1-96-109.Antonova LV, Sevostyanova VV, Kutikhin AG, Velikanova ЕA, Matveeva VG, Glushkova TV et al. Influence of bFGF, SDF-1α, or VEGF incorporated into tubular polymer scaffolds on the formation of smalldiameter tissue-engineered blood vessel in vivo. Russian Journal of Transplantology and Artificial Organs. 2018; 20 (1): 96–109. [In Russ, English abstract]. doi: 10.15825/1995-1191-2018-1-96-109.Ando J, Yamamoto K. Effects of shear stress and stretch on endothelial function. Antioxid Redox Signal. 2011; 15 (5): 1389–1403. doi: 10.1089/ars.2010.3361.Ando J, Yamamoto K. Effects of shear stress and stretch on endothelial function. Antioxid Redox Signal. 2011; 15 (5): 1389–1403. doi: 10.1089/ars.2010.3361.Chien S. Mechanotransduction and endothelial cell homeostasis: the wisdom of the cell. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007; 292 (3): H1209-24. doi: 10.1152/ajpheart.01047.2006.Chien S. Mechanotransduction and endothelial cell homeostasis: the wisdom of the cell. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007; 292 (3): H1209-24. doi: 10.1152/ajpheart.01047.2006.Bilodeau K, Mantovani D. Bioreactors for tissue engineering: focus on mechanical constraints. A comparative review. Tissue Eng. 2006; 12 (8): 2367–2383. doi: 10.1089/ten.2006.12.2367.Bilodeau K, Mantovani D. Bioreactors for tissue engineering: focus on mechanical constraints. A comparative review. Tissue Eng. 2006; 12 (8): 2367–2383. doi: 10.1089/ten.2006.12.2367.Plein A, Fantin A, Denti L, Pollard J, Ruhrberg C. Erythromieloid progenitors contribute endothelial cells to blood vessels. Nature. 2018; 562 (7726): 223–228. doi: 10.1038/s41586-018-0552-x.Plein A, Fantin A, Denti L, Pollard J, Ruhrberg C. Erythromieloid progenitors contribute endothelial cells to blood vessels. Nature. 2018; 562 (7726): 223–228. doi: 10.1038/s41586-018-0552-x.Lin Y, Weisdorf DJ, Solovey A, Hebbel RP. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. J Clin Invest. 2000; 105 (1): 71–77. doi: 10.1172/JCI8071.Lin Y, Weisdorf DJ, Solovey A, Hebbel RP. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. J Clin Invest. 2000; 105 (1): 71–77. doi: 10.1172/JCI8071.Estes ML, Mund JA, Ingram DA, Case J. Identification of endothelial cells and progenitor cell subsets in human peripheral blood. Curr Protoc Cytom. 2010; 52 (1): 9.33.1–9.33.11. doi: 10.1002/0471142956.cy0933s52.Estes ML, Mund JA, Ingram DA, Case J. Identification of endothelial cells and progenitor cell subsets in human peripheral blood. Curr Protoc Cytom. 2010; 52 (1): 9.33.1–9.33.11. doi: 10.1002/0471142956.cy0933s52.Lee PS, Poh KK. Endothelial progenitor cells in cardiovascular diseases. World J Stem Cells. 2014; 6 (3): 355–366. doi: 10.4252/wjsc.v6.i3.355.Lee PS, Poh KK. Endothelial progenitor cells in cardiovascular diseases. World J Stem Cells. 2014; 6 (3): 355–366. doi: 10.4252/wjsc.v6.i3.355.Krawiec JT, Liao HT, Lily Kwan LY, D’Amore A, Weinbaum JS, Rubin JP et al. Evaluation of the stromal vascular fraction of adipose tissue as the basis for a stem cell-based tissue-engineered vascular graft. J Vasc Surg. 2017; 66 (3): 883–890.e1. doi: 10.1016/j.jvs.2016.09.034.Krawiec JT, Liao HT, Lily Kwan LY, D’Amore A, Weinbaum JS, Rubin JP et al. Evaluation of the stromal vascular fraction of adipose tissue as the basis for a stem cell-based tissue-engineered vascular graft. J Vasc Surg. 2017; 66 (3): 883–890.e1. doi: 10.1016/j.jvs.2016.09.034.Luo J, Qin L, Zhao L, Gui L, Ellis VW, Huang Y et al. Tissue-engineered vascular grafts with advanced mechanical strength from human iPSCs. Cell Stem Cell. 2020; 26 (2): 251–261.e8. doi: 10/1016/j.stem.2019.12.012.Luo J, Qin L, Zhao L, Gui L, Ellis VW, Huang Y et al. Tissue-engineered vascular grafts with advanced mechanical strength from human iPSCs. Cell Stem Cell. 2020; 26 (2): 251–261.e8. doi: 10/1016/j.stem.2019.12.012.Fukunishi T, Best CA, Ong CS, Groehl T, Reinhardt J, Yi T et al. Role of Bone Marrow Mononuclear Cell Seeding for Nanofiber Vascular Grafts. Tissue Engineering Part A. 2018; 24 (1–2): doi: 10.1089/ten.TEA.2017.0044.Fukunishi T, Best CA, Ong CS, Groehl T, Reinhardt J, Yi T et al. Role of Bone Marrow Mononuclear Cell Seeding for Nanofiber Vascular Grafts. Tissue Engineering Part A. 2018; 24 (1–2): doi: 10.1089/ten.TEA.2017.0044.Matveeva VG, Khanova MYu, Sardin ES, Antonova LV, Barbarash OL. Endovascular Interventions Permit Isolation of Endothelial Colony-Forming Cells from Peripheral Blood. Int J Mol Sci. 2018; 19 (11): 3453. doi: 10.3390/ijms19113453.Matveeva VG, Khanova MYu, Sardin ES, Antonova LV, Barbarash OL. Endovascular Interventions Permit Isolation of Endothelial Colony-Forming Cells from Peripheral Blood. Int J Mol Sci. 2018; 19 (11): 3453. doi: 10.3390/ijms19113453.Aper T, Kolster M, Hilfiker A, Teebken OE, Haverich A. Fibrinogen Preparations for Tissue Engineering Approaches. J Bioengineer & Biomedical Sci. 2012; 2 (3): 115. doi: 10.4172/2155-9538.1000115.Aper T, Kolster M, Hilfiker A, Teebken OE, Haverich A. Fibrinogen Preparations for Tissue Engineering Approaches. J Bioengineer & Biomedical Sci. 2012; 2 (3): 115. doi: 10.4172/2155-9538.1000115.Великанова ЕА, Кутихин АГ, Матвеева ВГ, Тупикин АЕ, Кабилов МР, Антонова ЛВ. Сравнение профиля генной экспрессии колониеформирующих эндотелиальных клеток из периферической крови человека и эндотелиальных клеток коронарной артерии. Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2020; 9 (2): 74–81. doi: 10.17802/2306-1278-2020-9-2-74-81.Velikanova EA. Kutikhin AG, Matveeva VG, Tupikin AE, Kabilov MR, Antonova LV. Comparison of gene expression profiles of human peripheral blood derived endothelial colonyforming cells and coronary artery endothelial cells. Complex Issues of Cardiovascular Diseases. 2020; 9 (2): 74–81. [In Russ, English abstract]. doi: 10.17802/2306-1278-2020-9-2-74-81.Chien S. Mechanotransduction and endothelial cell homeostasis: the wisdom of the cell. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007; 292 (3): H1209-24. doi: 10.1152/ajpheart.01047.2006.Chien S. Mechanotransduction and endothelial cell homeostasis: the wisdom of the cell. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007; 292 (3): H1209-24. doi: 10.1152/ajpheart.01047.2006.Davies PF. Hemodynamic shear stress and the endothelium in cardiovascular pathophysiology. Nat Clin Pract Cardiovasc Med. 2009; 6 (1): 16–26. doi: 10.1038/ncpcardio1397.Davies PF. Hemodynamic shear stress and the endothelium in cardiovascular pathophysiology. Nat Clin Pract Cardiovasc Med. 2009; 6 (1): 16–26. doi: 10.1038/ncpcardio1397.Tzima E, Irani-Tehrani M, Kiosses WB, Dejana E, Schultz DA, Engelhardt B et al. A mechanosensory complex that mediates the endothelial cell response to fluid shear stress. Nature. 2005; 437 (7057): 426–431. doi: 10.1038/nature03952.Tzima E, Irani-Tehrani M, Kiosses WB, Dejana E, Schultz DA, Engelhardt B et al. A mechanosensory complex that mediates the endothelial cell response to fluid shear stress. Nature. 2005; 437 (7057): 426–431. doi: 10.1038/nature03952.Nayak L, Lin Z, Jain MK. «Go With the Flow»: How Krüppel-Like Factor 2 Regulates the Vasoprotective Effects of Shear Stress. Antioxidants & Redox Signaling. 2011; 15 (5): 1449–1461. doi: 10.1089/ars.2010.3647.Nayak L, Lin Z, Jain MK. «Go With the Flow»: How Krüppel-Like Factor 2 Regulates the Vasoprotective Effects of Shear Stress. Antioxidants & Redox Signaling. 2011; 15 (5): 1449–1461. doi: 10.1089/ars.2010.3647.Yazdani SK, Tillman BW, Berry JL, Soker S, Geary RL. The fate of an endothelium layer after preconditioning. J Vasc Surg. 2010; 51 (1): 174–183. doi: 10.1016/j.jvs.2009.08.074.Yazdani SK, Tillman BW, Berry JL, Soker S, Geary RL. The fate of an endothelium layer after preconditioning. J Vasc Surg. 2010; 51 (1): 174–183. doi: 10.1016/j.jvs.2009.08.074.Melchiorri AJ, Bracaglia LG, Kimerer LK, Hibino N, Fisher JP. In Vitro Endothelialization of Biodegradable Vascular Grafts Via Endothelial Progenitor Cell Seeding and Maturation in a Tubular Perfusion System Bioreactor. Tissue Eng Part C Methods. 2016; 22 (7): 663–670. doi: 10.1089/ten.TEC.2015.0562.Melchiorri AJ, Bracaglia LG, Kimerer LK, Hibino N, Fisher JP. In Vitro Endothelialization of Biodegradable Vascular Grafts Via Endothelial Progenitor Cell Seeding and Maturation in a Tubular Perfusion System Bioreactor. Tissue Eng Part C Methods. 2016; 22 (7): 663–670. doi: 10.1089/ten.TEC.2015.0562.Tondreau MY, Laterreur V, Gauvin R, Vallières K, Bourget JM, Lacroix D et al. Mechanical properties of endothelialized fibroblast-derived vascular scaffolds stimulated in a bioreactor. Acta Biomater. 2015; 18: 176–185. doi: 10.1016/j.actbio.2015.02.026.Tondreau MY, Laterreur V, Gauvin R, Vallières K, Bourget JM, Lacroix D et al. Mechanical properties of endothelialized fibroblast-derived vascular scaffolds stimulated in a bioreactor. Acta Biomater. 2015; 18: 176–185. doi: 10.1016/j.actbio.2015.02.026.Liu J-X, Yan Z-P, Zhang Y-Y, Wu J, Liu X-H, Zeng Y. Hemodynamic shear stress regulates the transcriptional expression of heparan sulfate proteoglycans in human umbilical vein endothelial cell. Cell Mol Biol. 2016; 62 (8): 28–34. doi: 10.14715/cmb/2016.62.8.5.Liu J-X, Yan Z-P, Zhang Y-Y, Wu J, Liu X-H, Zeng Y. Hemodynamic shear stress regulates the transcriptional expression of heparan sulfate proteoglycans in human umbilical vein endothelial cell. Cell Mol Biol. 2016; 62 (8): 28–34. doi: 10.14715/cmb/2016.62.8.5.Zhou J, Li Y-S, Chien S. Shear stress-initiated signaling and its regulation of endothelial function. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2014; 34 (10): 2191–2198. doi: 10.1161/ATVBAHA.114.303422.Zhou J, Li Y-S, Chien S. Shear stress-initiated signaling and its regulation of endothelial function. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2014; 34 (10): 2191–2198. doi: 10.1161/ATVBAHA.114.303422.Davies PF. Hemodynamic shear stress and the endothelium in cardiovascular pathophysiology. Nat Clin Pract Cardiovasc Med. 2009; 6 (1): 16–26. doi: 10.1038/ncpcardio1397.Davies PF. Hemodynamic shear stress and the endothelium in cardiovascular pathophysiology. Nat Clin Pract Cardiovasc Med. 2009; 6 (1): 16–26. doi: 10.1038/ncpcardio1397.Tzima E. Role of small GTPases in endothelial cytoskeletal dynamics and the shear stress response. Circ Res. 2006; 98 (2): 176–185. doi: 10.1161/01.RES.0000200162.94463.d7.Tzima E. Role of small GTPases in endothelial cytoskeletal dynamics and the shear stress response. Circ Res. 2006; 98 (2): 176–185. doi: 10.1161/01.RES.0000200162.94463.d7.Burridge K, Wittchen ES. The tension mounts: Stress fibers as force-generating mechanotransducers. J Cell Biol. 2013; 200 (1): 9–19. doi: 10.1083/jcb.201210090.Burridge K, Wittchen ES. The tension mounts: Stress fibers as force-generating mechanotransducers. J Cell Biol. 2013; 200 (1): 9–19. doi: 10.1083/jcb.201210090.Murphy KN, Brinkworth AJ. Manipulation of Focal Adhesion Signaling by Pathogenic Microbes. Int J Mol Sci. 2021; 22 (3): 1358. doi: 10.3390/ijms22031358.Murphy KN, Brinkworth AJ. Manipulation of Focal Adhesion Signaling by Pathogenic Microbes. Int J Mol Sci. 2021; 22 (3): 1358. doi: 10.3390/ijms22031358.Wozniak MA, Modzelewska K, Kwong L, Keely PJ. Focal adhesion regulation of cell behavior. Biochim Biophys Acta. 2004; 1692 (2–3): 103–119. doi: 10.1016/j.bbamcr.2004.04.007.Wozniak MA, Modzelewska K, Kwong L, Keely PJ. Focal adhesion regulation of cell behavior. Biochim Biophys Acta. 2004; 1692 (2–3): 103–119. doi: 10.1016/j.bbamcr.2004.04.007.Parsons JT, Horwitz AR, Schwartz MA. Cell adhesion: integrating cytoskeletal dynamics and cellular tension. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010; 11 (9): 633–643. doi: 10.1038/nrm2957.Parsons JT, Horwitz AR, Schwartz MA. Cell adhesion: integrating cytoskeletal dynamics and cellular tension. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010; 11 (9): 633–643. doi: 10.1038/nrm2957.Kanchanawong P, Shtengel G, Pasapera AM, Ramko EB, Davidson MW, Hess HF, Waterman CM. Nanoscale architecture of integrin-based cell adhesions. Nature. 2010; 468 (7323): 580–584. doi: 10.1038/nature09621.Kanchanawong P, Shtengel G, Pasapera AM, Ramko EB, Davidson MW, Hess HF, Waterman CM. Nanoscale architecture of integrin-based cell adhesions. Nature. 2010; 468 (7323): 580–584. doi: 10.1038/nature09621.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.